RNA 분리과정에서 사용되는 용액의 사용원리(TRIZOL 용액)

TRIZOL이란 무엇인가?

TRIZOL은 생물학적 샘플로부터 RNA, DNA, 단백질을 동시에 분리하고 정제하는 데 사용되는 시약입니다.

 

TRIZOL은 페놀과 구아니딘 이소티오시아네이트를 주요 성분으로 포함하며, RNA 분리 과정에서 강력한 변성 및 단백질 제거 효과를 나타냅니다.

 

TRIZOL은 Invitrogen에서 상업적으로 판매되며, RNA 분리 실험에서 널리 사용됩니다.

TRIZOL의 작용 원리

TRIZOL을 사용한 RNA 분리 과정은 다음과 같은 단계를 포함합니다:

1. 세포 용해 및 단백질 변성: TRIZOL에는 페놀과 구아니딘 이소티오시아네이트가 포함되어 있어 세포막과 핵막을 파괴하고, 단백질을 변성시켜 RNA를 방출합니다. 이 과정은 효소의 활성화를 억제하여 RNA를 보호합니다. 구아니딘 이소티오시아네이트는 단백질을 변성시키고, 페놀은 단백질과 지질을 용해시켜 단백질과 지질로부터 RNA를 분리합니다.
2. 상분리: 용해된 샘플에 클로로포름을 첨가하고 원심분리를 통해 수상층(aqueous phase)과 유기층(organic phase), 그리고 중간층(interphase)으로 분리합니다. 수상층에는 RNA가, 유기층에는 단백질과 지질이, 중간층에는 DNA가 포함됩니다. 이 단계에서 수상층을 신중하게 회수하여 RNA를 분리합니다.
3. RNA 침전: 회수된 수상층에 아이소프로판올을 첨가하여 RNA를 침전시킵니다. RNA는 아이소프로판올과 반응하여 불용성 복합체를 형성하며, 원심분리를 통해 RNA 침전물을 얻습니다. 침전된 RNA는 에탄올로 세척하여 잔여 염과 용매를 제거합니다.
4. RNA 재용해: 최종적으로 RNA 침전물을 DEPC 처리된 물이나 TE 완충액에 용해하여 사용 준비를 완료합니다. 이 과정은 RNA의 순도와 농도를 보장하기 위해 중요한 단계입니다.

TRIZOL의 장점

1. 높은 수율과 순도: TRIZOL을 사용하면 높은 수율과 순도의 RNA를 얻을 수 있습니다. 이는 페놀과 구아니딘 이소티오시아네이트의 강력한 변성 및 단백질 제거 효과 덕분입니다.
2. 다중 분리 기능: TRIZOL은 RNA뿐만 아니라 DNA와 단백질도 동시에 분리할 수 있어, 다양한 분자 생물학적 분석에 유용합니다.
3. 효과적인 효소 억제: TRIZOL은 RNase와 같은 효소를 효과적으로 억제하여 RNA 분해를 방지합니다. 이는 RNA 분리 과정에서 RNA의 안정성을 보장합니다.

주의사항 및 단점

1. 독성: TRIZOL은 페놀과 구아니딘 이소티오시아네이트를 포함하고 있어 매우 독성이 강합니다. 취급 시 장갑과 보호경을 착용하고, 환기가 잘 되는 곳에서 작업해야 합니다.
2. 취급의 어려움: TRIZOL을 사용한 RNA 분리 과정은 많은 단계와 신중한 취급이 필요합니다. 특히, 상분리 과정에서 수상층을 정확히 분리하는 것이 중요합니다.
3. 비용: TRIZOL은 상업적으로 판매되는 시약으로, 비용이 다소 높을 수 있습니다. 그러나 높은 수율과 순도를 고려할 때 그 가치는 충분합니다.

결론적으로, TRIZOL은 RNA 분리 과정에서 강력하고 효율적인 시약으로, 높은 수율과 순도의 RNA를 얻을 수 있게 해줍니다.

 

그러나 독성과 취급의 어려움 때문에 사용 시 주의가 필요하며, 안전하게 사용하기 위해 적절한 보호 장비를 갖추고 작업하는 것이 중요합니다.